分光光度計所采用的分光光度法在定量分析領域中的應用已有數(shù)十年的歷史,至今仍是實驗室中常用的分析方法之一。隨著現(xiàn)代科學儀器的不斷發(fā)展,在傳統(tǒng)的追求準確、快速、可靠的同時,小型化、智能化、在線化、網(wǎng)絡化成為了現(xiàn)代可見分光光度計新的增長點。
結構組成
分光光度計的基本組成和大多數(shù)分光光度計一樣,都是由光源、單色器、比色池、光電檢測器和放大器幾部分組成。
1.光源
分光光度計的可見區(qū)的光源仍是采用鹵素鎢燈和氘燈。鹵素鎢燈的工作波長范圍為:320～2500nm,氘燈的工作波長范圍為180～375nm。兩光源有儀器上的一個燈選擇反射鏡自動進行選擇和光源切換。
1.2單色器(分光系統(tǒng))
單色器是分光光度計的重要部分,比濾光片選擇波長能更有效地提供帶寬窄的單色光。是采用先進的光柵單色器,由入射狹縫、出口狹縫、色散元件、準直鏡等光學元件組成。入射狹縫是用來調節(jié)入射單色光的純度和強度，也直接影響分辨率。而準直鏡(反射凹面鏡)的作用一是將入射光束變?yōu)槠叫泄馐笤龠M入色散元件，二是把來自色散元件的平行光束聚焦于出口狹縫上,形成光譜像。出口狹縫是單色光的出口，它只讓光譜帶中所需要波長的光從狹縫中透出，而將其他波長的光擋住,不讓其通過。
色散元件是單色器中的核心元件，起著將復合光分解為單色光的作用。分光光度計的色散元件是凹面反射式全息光柵,它本身就起著分解復合光和準直鏡(聚焦)的作用,而且全息光柵具有雜散光小、不產(chǎn)生偽線和分辨率高的優(yōu)點。
1.3比色池
分光光度計配有多種規(guī)格樣品池架和比色杯。池架有標準池架、七位池架、50霯微量池架和多形態(tài)樣品池架。比色杯有常量(2～4mL)、半微量(0.5～1mL)和微量(50～100霯),使用方便。另外還配有樣品架卡套,分為特為酶動力學設計的半導體溫控池:溫度范圍15～50℃,和流動池。
正確使用分光光度計
分光光度計操作簡便。
打開儀器電源開關，儀器應順利通過自檢，然后預熱10分鐘左右，可以進行測定。讀數(shù)時應記錄顯示的數(shù)值，不要讓樣品連續(xù)光照時間太長(動力學測定除外)，特別是在紫外區(qū)域測定時更要快速，因為隨著光的連續(xù)照射讀數(shù)會下降，變得不穩(wěn)定。而應用顯色劑顯色后會使讀數(shù)穩(wěn)定，給測定帶來方便，同時還會使物質中許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到數(shù)十萬，明顯提高了檢測靈敏度。
作為一種分子吸收光譜儀,廣泛應用于化學研究、生物醫(yī)藥、環(huán)境科學和食品分析等研究領域。它具有分析精度高、應用范圍廣、分析簡便快速和儀器靈敏度較高的優(yōu)點,是目前大多數(shù)實驗室常用的定量分析儀器。
標簽:
分光光度計
